logotype
image1 image2 image3

Print E-mail

Proiect: MECANISMELE PERIFERICE ALE DURERII INFLAMATORII: ROLUL CANALELOR ACTIVATE DE TEMPERATURILE EXTREME, TRPA1 SI TRPV2

DIRECTOR DE PROIECT : PROF. DR. ALEXANDRU BABES

 

Modul de organizare a proiectului (managementul proiectului):
Planul de lucru. Obiective si activitati

An Obiective (Denumirea obiectivului) Activitati asociate Grad de realizare
2007 1. Inregistrarea activitatii TRPV2 in neuroni din GS in culturi primare : raspunsul la stimuli termici si chimici 1. Obtinerea de culturi primare de neuroni din GS.
2. Punerea la punct a protocolului de stimulare termica prin incalzirea neuronilor la temperaturi de peste 52 C.
3. Inregistrarile propriu-zise folosind tehnica de patch-clamp si imagistica de calciu, identificarea de noi antagonisti pentru TRPV2 si analiza rezultatelor.
1. Realizat 100%

2. Realizat 100%

3. Realizat 100%

 

2007 2. Inregistrarea activitatii TRPA1 in neuroni din GS in culturi primare : raspunsul la stimuli termici si chimici 1. Obtinerea de culturi primare de neuroni din GS.
2. Punerea la punct a protocolului de stimulare termica prin racirea neuronilor la temperaturi sub 15 C.
3. Inregistrarile propriu-zise folosind tehnica de patch-clamp si imagistica de calciu si analiza rezultatelor.
1. Realizat 100%

2. Realizat 100%

3. Realizat 100%

 

2008 1. Transfectarea tranzitorie si stabila a celulelor HEK293 cu TRPV2 si TRPA1. 1. Punerea la punct a culturii de celule HEK293. (TRPA1) si GFP (green fluorescent protein) pentru identificarea celulelor transfectate.
2. Transfectarea tranzitorie prin metoda fosfatului de calciu: celulele vor fi co-transfectate cu TRPV2.
3. Obtinerea de linii celulare stabil transfectate.
1. Realizat 100%

2. Realizat 100%

3. Realizat 100%

 

2008 2. Studiul efectului unor mediatori inflamatori asupra TRPV2: bradikinina (BK), prostaglandina E2 (PGE2), NGF, etc… in neuroni din GS in cultura. 1. Punerea la punct a protocolului experimental de aplicare a agentilor inflamatori.
2. Inregistrarea efectelor BK, PGE2 si NGF si analiza rezultatelor.
1. Realizat 100%

2. Realizat 100%

 

2008 3. Studiul efectului unor mediatori inflamatori asupra TRPA1 (bradikinina, prostaglandina E2, NGF, etc…) in neuroni GRD in cultura. 1. Punerea la punct a protocolului experimental de aplicare a agentilor inflamatori.
2. Inregistrarea efectelor BK, PGE2 si NGF si analiza rezultatelor.
1. Realizat 100%

2. Realizat 100%

 

2009 1. Identificarea cailor de semnalizare implicate in modularea TRPV2 de catre mediatorii inflamatori. 1. Aplicarea de agonisti si antagonisti ai receptorilor pentru mediatori si monitorizarea efectului acestora asupra modularii TRPV2 in neuroni GS.
2. Aplicarea de agonisti si antagonisti ai factorilor intracelulari care participa la caile de semnalizare intracelulare (PKA, PKC, PI3K, etc…): monitorizarea efectului acestor agenti asupra modularii TRPV2 exprimat in celule HEK293.
3. Analiza rezultatelor.
1. Realizat 100%

2. Realizat 100%

 

2009 2. Identificarea cailor de semnalizare implicate in modularea TRPA1 de catre mediatorii inflamatori. 1. Aplicarea de agonisti si antagonisti ai receptorilor pentru mediatori si monitorizarea efectului acestora asupra modularii TRPA1 in neuroni GS.
2. Aplicarea de agonisti si antagonisti ai factorilor intracelulari care participa la caile de semnalizare intracelulare (PKA, PKC, PI3K, etc…): monitorizarea efectului acestor agenti asupra modularii TRPA1 exprimat in celule HEK293.
3. Analiza rezultatelor.
1. Realizat 100%

2. Realizat 100%

3. Realizat 100%

 

2009 3. Introducerea tehnicilor skin-nerve si a inregistrarilor pe cornea de cobai. 1. Punerea la punct a instalatiei experimentale.
2. Aplicarea protocolului de stimulare termica si chimica a terminatiilor nervoase cutanate.
1. Amânat pentru 2010. In curs de realizare.

2. Amânat pentru 2010. In curs de realizare.

 

2010 1. Inregistrarea activitatii electrice induse de TRPV2 si TRPA1 in axonii senzitivi de soarece si sobolan. 1. Aplicarea de agonisti TRPV2 (2-APB) si TRPA1 (aldehida cinamica) si monitorizarea potentialelor de actiune.
2. Validarea rezultatelor obtinute pe modelele celulare (neuroni din GS si celule HEK) prin aplicarea de mediatori inflamatori la nivelul terminatiilor nervoase si identificarea efectelor acestora asupra TRPV2 si TRPA1.
3. Analiza rezultatelor.
1. In curs de realizare

2. In curs de realizare

 

2010 2. Introducerea tehnicii single-cell RT-PCR si a interferentei la nivel de ARN mesager. 1. Optimizarea instalatiilor experimentale si a protocoalelor de lucru.
2. Obtinerea de dovezi cu privire la expresia TRPV2 si TRPA1 in categorii de neuroni din GS identificati functional.
1. Realizat 100%

2. Realizat 100%

 

2010 3. Studiul efectului inhibarii expresiei TRPV2 si TRPA1 in neuroni din GS in cultura cu ajutorul interferentei la nivel de ARN mesager (folosind molecule de siRNA-small interfering RNA). 1. Incubarea culturilor primare de neuroni din GS cu molecule de siRNA sintetizate pentru blocarea sintezei de TRPV2 si TRPA1.
2. Inregistrarea raspunsului neuronilor tratati cu siRNA la stimuli termici si la agonisti ai TRPV2 si TRPA1.
3. Analiza rezultatelor.
1. In curs de realizare

2. In curs de realizare

3. In curs de realizare

 

Inapoi la proiect